ମହମବତୀ ଏବଂ ସାବୁନ ତିଆରି ପାଇଁ ବିଶୁଦ୍ଧ ସାପୋଶନିକୋଭିଆ ଡିଭାରିକାଟା ତେଲ ହୋଲସେଲ ଡିଫ୍ୟୁଜର ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ତେଲ ରିଡ୍ ବର୍ନର ଡିଫ୍ୟୁଜର ପାଇଁ ନୂତନ

ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣନା:

 

୨.୧. SDE ର ପ୍ରସ୍ତୁତି

SD ର ରାଇଜୋମ ଗୁଡିକୁ ହାନହେର୍ବ କୋ. (ଗୁରି, କୋରିଆ) ରୁ ଶୁଖିଲା ଔଷଧ ଭାବରେ କିଣାଯାଇଥିଲା। କୋରିଆ ଇନଷ୍ଟିଚ୍ୟୁଟ୍ ଅଫ୍ ଓରିଏଣ୍ଟାଲ୍ ମେଡିସିନ୍ (KIOM) ର ଡକ୍ଟର ଗୋ-ୟା ଚୋଇ ଦ୍ୱାରା ଉଦ୍ଭିଦ ସାମଗ୍ରୀଗୁଡ଼ିକୁ ଶ୍ରେଣୀବଦ୍ଧ ଭାବରେ ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ଭାଉଚର ନମୁନା (ସଂଖ୍ୟା 2014 SDE-6) କୋରିଆନ୍ ହର୍ବାରିଆମ୍ ଅଫ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ହର୍ବାଲ୍ ରିସୋର୍ସେସ୍ ରେ ଜମା କରାଯାଇଥିଲା। SD ର ଶୁଖିଲା ରାଇଜୋମ (320 ଗ୍ରାମ) କୁ 70% ଇଥାନଲ୍ (2 ଘଣ୍ଟା ରିଫ୍ଲକ୍ସ ସହିତ) ସହିତ ଦୁଇଥର ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପରେ ନିଷ୍କାସନକୁ ହ୍ରାସ ଚାପରେ ଘନିଷ୍ଠ କରାଯାଇଥିଲା। କାକସନକୁ ଫିଲ୍ଟର, ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 4°C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଅଶୋଧିତ ଆରମ୍ଭ ସାମଗ୍ରୀରୁ ଶୁଖିଲା ନିଷ୍କାସନର ଉତ୍ପାଦନ 48.13% (w/w) ଥିଲା।

 

୨.୨. ପରିମାଣାତ୍ମକ ଉଚ୍ଚ-କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (HPLC) ବିଶ୍ଳେଷଣ

କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏକ HPLC ସିଷ୍ଟମ୍ (ୱାଟର୍ସ କୋ., ମିଲଫୋର୍ଡ, MA, USA) ଏବଂ ଏକ ଫଟୋଡାୟୋଡ୍ ଆରେ ଡିଟେକ୍ଟର ସହିତ କରାଯାଇଥିଲା। SDE ର HPLC ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, ପ୍ରାଇମ୍-O-ଗ୍ଲୁକୋସିଲସିମିଫ୍ୟୁଜିନ୍ ମାନକ କୋରିଆ ପ୍ରମୋସନ୍ ଇନଷ୍ଟିଚ୍ୟୁଟ୍ ଫର୍ ପାରମ୍ପରିକ ଔଷଧ ଶିଳ୍ପ (ଗ୍ୟୋଙ୍ଗସାନ୍, କୋରିଆ) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା, ଏବଂସେକେଣ୍ଡ-O-ଗ୍ଲୁକୋସିଲହାମାଉଡୋଲ ଏବଂ 4′-O-β-ଡି-ଗ୍ଲୁକୋସିଲ୍-୫-O-ମିଥାଇଲଭିସାମିନଲକୁ ଆମ ପରୀକ୍ଷାଗାର ମଧ୍ୟରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଲ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା, ମୁଖ୍ୟତଃ NMR ଏବଂ MS ଦ୍ୱାରା।

SDE ନମୁନା (0.1 mg) 70% ଇଥାନଲ୍ (10 mL) ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୋଇଥିଲା। କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ପୃଥକୀକରଣ ଏକ XSelect HSS T3 C18 ସ୍ତମ୍ଭ (4.6 × 250 mm, 5) ସହିତ କରାଯାଇଥିଲାμମି, ୱାଟର୍ସ କୋ., ମିଲଫୋର୍ଡ, ଏମଏ, ୟୁଏସଏ)। ଚଳନ୍ତି ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍ (A) ଏବଂ 0.1% ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପାଣି (B) ରେ 1.0 ମିଲି/ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାରରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଥିଲା। ଏକ ମଲ୍ଟିଷ୍ଟେପ୍ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା: 5% A (0 ମିନିଟ୍), 5-20% A (0-10 ମିନିଟ୍), 20% A (10-23 ମିନିଟ୍), ଏବଂ 20-65% A (23-40 ମିନିଟ୍)। ଚିହ୍ନଟ ତରଙ୍ଗଦୈର୍ଘ୍ୟ 210-400 nm ରେ ସ୍କାନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 254 nm ରେ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା। ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ପରିମାଣ 10.0 ଥିଲା।μL. ତିନୋଟି କ୍ରୋମୋନର ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ମାନକ ସମାଧାନ 7.781 mg/mL ର ଅନ୍ତିମ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା (ପ୍ରାଇମ-O-ଗ୍ଲୁକୋସିଲସିମିଫ୍ୟୁଜିନ୍), 31.125 ମିଗ୍ରା/ମିଲି (4′-O-β-ଡି-ଗ୍ଲୁକୋସିଲ୍-୫-O-ମିଥାଇଲଭିସାମିନୋଲ), ଏବଂ 31.125 ମିଗ୍ରା/ମିଲି (ସେକେଣ୍ଡ-O-ଗ୍ଲୁକୋସିଲହାମାଉଡୋଲ) ମିଥାନଲରେ ଏବଂ 4°C ରେ ରଖାଯାଇଥାଏ।

୨.୩. ପ୍ରଦାହ-ବିରୋଧୀ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନଭିଟ୍ରୋରେ

୨.୩.୧. କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ଏବଂ ନମୁନା ଚିକିତ୍ସା

ଆମେରିକୀୟ ପ୍ରକାର ସଂସ୍କୃତି ସଂଗ୍ରହ (ATCC, ମାନସାସ, VA, USA) ରୁ RAW 264.7 କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 1% ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍ ଏବଂ 5.5% FBS ଯୁକ୍ତ DMEM ମାଧ୍ୟମରେ ଚାଷ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 37°C ତାପମାତ୍ରାରେ 5% CO2 ର ଆର୍ଦ୍ର ପରିବେଶରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିବା ପାଇଁ, ମାଧ୍ୟମକୁ ତାଜା DMEM ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ବଦଳାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ 1 ରେ ଲାଇପୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) କରାଯାଇଥିଲା।μSDE (200 କିମ୍ବା 400) ର ଉପସ୍ଥିତି କିମ୍ବା ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ g/mL ଯୋଡା ଯାଇଥିଲାμg/mL) ଅତିରିକ୍ତ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ।

୨.୩.୨. ନାଇଟ୍ରିକ୍ ଅକ୍ସାଇଡ୍ (NO), ପ୍ରୋଷ୍ଟାଗ୍ଲାଣ୍ଡିନ୍ E2 (PGE2), ଟ୍ୟୁମର ନେକ୍ରୋସିସ୍ କାରକ ନିର୍ଣ୍ଣୟ-α(TNF-)α), ଏବଂ ଇଣ୍ଟରଲ୍ୟୁକିନ-6 (IL-6) ଉତ୍ପାଦନ

କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ SDE ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ LPS ସହିତ ଉତ୍ତେଜିତ କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ଅନୁସାରେ ଗ୍ରିସ୍ ରିଏଜେଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ନାଇଟ୍ରାଇଟ୍ ମାପ କରି NO ଉତ୍ପାଦନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା [12]. ପ୍ରଦାହଜନକ ସାଇଟୋକାଇନ୍ସ PGE2, TNF- ର କ୍ଷରଣα, ଏବଂ ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ଏକ ELISA କିଟ୍ (R&D ସିଷ୍ଟମ୍) ବ୍ୟବହାର କରି IL-6 ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। NO ଏବଂ ସାଇଟୋକାଇନ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଉପରେ SDE ର ପ୍ରଭାବ 540 nm କିମ୍ବା 450 nm ରେ ଏକ Wallac EnVision ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।™ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର (ପର୍କିନ୍‌ଏଲ୍‌ମର)।

୨.୪. ଆଣ୍ଟିଓସ୍ଟୋଆର୍ଥ୍ରାଇଟିସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନଭିଭୋରେ

୨.୪.୧. ପଶୁପକ୍ଷୀ

ପୁରୁଷ ସ୍ପ୍ରେଗ-ଡାଉଲି ମୂଷା (୭ ସପ୍ତାହ ବୟସ) କୁ ସାମଟାକୋ ଇନକର୍ପୋରେଟେଡ୍ (ଓସାନ, କୋରିଆ) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ଅବସ୍ଥାରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ ୧୨ ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ/ଅନ୍ଧକାର ଚକ୍ର ଥିଲା।°C ଏବଂ% ଆର୍ଦ୍ରତା। ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ପରୀକ୍ଷାଗାର ଖାଦ୍ୟ ଏବଂ ପାଣି ଯୋଗାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା।ଅନୁମତିପତ୍ର। ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଜାତୀୟ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ପ୍ରତିଷ୍ଠାନ (NIH) ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ପାଳନ କରି କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଡେଜେଓନ୍ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟ (ଡେଜେଓନ୍, କୋରିଆ ଗଣରାଜ୍ୟ)ର ପ୍ରାଣୀ ଯତ୍ନ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କମିଟି ଦ୍ୱାରା ଅନୁମୋଦିତ ହୋଇଥିଲା।

୨.୪.୨. ମୂଷାଙ୍କଠାରେ MIA ସହିତ OA ର ପ୍ରବେଶ

ଅଧ୍ୟୟନ ଆରମ୍ଭ ହେବା ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କୁ ଅନିୟମିତ ଭାବରେ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ନ୍ୟସ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା (ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀ ପାଇଁ) । MIA ଦ୍ରବଣ (3 mg/50)μ୦.୯% ସାଲାଇନର L) କୁ କେଟାମାଇନ୍ ଏବଂ ଜାଇଲାଜିନ୍ ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ନିଶ୍ଚେତକ ଅଧୀନରେ ଡାହାଣ ଆଣ୍ଠୁର ଆଣ୍ଠୁ ମଧ୍ୟରେ ସିଧାସଳଖ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ କରାଯାଇଥିଲା। ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ଅନିୟମିତ ଭାବରେ ଚାରୋଟି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା: (୧) କୌଣସି MIA ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ବିନା ସାଲାଇନ ଗୋଷ୍ଠୀ, (୨) MIA ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ସହିତ MIA ଗୋଷ୍ଠୀ, (୩) MIA ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ସହିତ SDE-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ (୨୦୦ ମିଗ୍ରା/କିଗ୍ରା), ଏବଂ (୪) MIA ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ସହିତ ଇଣ୍ଡୋମେଥାସିନ୍- (IM-) ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ (୨ ମିଗ୍ରା/କିଗ୍ରା)। ମୂଷାମାନଙ୍କୁ 4 ସପ୍ତାହ ପାଇଁ MIA ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ପୂର୍ବରୁ SDE ଏବଂ IM ସହିତ ମୌଖିକ ଭାବରେ ପ୍ରଶାସିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ବ୍ୟବହୃତ SDE ଏବଂ IM ର ମାତ୍ରା ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରେ ନିଯୁକ୍ତ ବ୍ୟକ୍ତିଙ୍କ ଉପରେ ଆଧାରିତ ଥିଲା [10,13,14].

୨.୪.୩. ହିଣ୍ଡପା ଓଜନ-ବହନକାରୀ ବଣ୍ଟନର ମାପ

OA ଇଣ୍ଡକ୍ସନ ପରେ, ପଛପାଖର ଓଜନ ବହନ କ୍ଷମତାରେ ମୂଳ ସନ୍ତୁଳନ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା। ଓଜନ ବହନ ସହନଶୀଳତାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଅକ୍ଷମତା ପରୀକ୍ଷକ (ଲିଣ୍ଟନ୍ ଉପକରଣ, ନର୍ଫୋକ୍, ୟୁକେ) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ମାପ ଚାମ୍ବରରେ ସତର୍କତାର ସହିତ ରଖାଯାଇଥିଲା। ପଛପାଖ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିବା ଓଜନ ବହନ ଶକ୍ତିକୁ 3 ସେକେଣ୍ଡ ଅବଧି ମଧ୍ୟରେ ହାରାହାରି ଆକଳନ କରାଯାଇଥିଲା। ଓଜନ ବଣ୍ଟନ ଅନୁପାତ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସମୀକରଣ ଦ୍ୱାରା ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା: [ଡାହାଣ ପଛପାଖ ଉପରେ ଓଜନ/(ଡାହାଣ ପଛପାଖ ଉପରେ ଓଜନ + ବାମ ପଛପାଖ ଉପରେ ଓଜନ)] × 100 [15].

୨.୪.୪. ସେରମ୍ ସାଇଟୋକାଇନ୍ ସ୍ତରର ମାପ

ରକ୍ତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ 4°C ତାପମାତ୍ରାରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1,500 ଗ୍ରାମ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା; ତା'ପରେ ସେରମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ −70°C ତାପମାତ୍ରାରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। IL-1 ର ସ୍ତରβ, IL-6, TNF-α, ଏବଂ ସିରମରେ PGE2 ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ R&D ସିଷ୍ଟମ (ମିନିଆପୋଲିସ୍, MN, USA) ରୁ ELISA କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।

୨.୪.୫. ବାସ୍ତବ-ସମୟ ପରିମାଣାତ୍ମକ RT-PCR ବିଶ୍ଳେଷଣ

TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ଆଣ୍ଠୁ ଗଣ୍ଠି ଟିସୁରୁ ମୋଟ RNA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା, cDNA ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ ସହିତ TM One Step RT PCR କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି PCR-ଆମ୍ପ୍ଲିଫାଏ କରାଯାଇଥିଲା (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA)। Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR ସିଷ୍ଟମ୍ (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରକୃତ-ସମୟ ପରିମାଣାତ୍ମକ PCR କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରାଇମର କ୍ରମ ଏବଂ ପ୍ରୋବ୍-କ୍ରମ ସାରଣୀରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।1। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁସାରେ (ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋସିଷ୍ଟମ୍ସ, ଫୋଷ୍ଟର, CA, USA) ଡିଏନଏ ପଲିମରେଜ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା TaqMan® ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ PCR ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ନମୁନା cDNA ର ସମାନ ପରିମାଣ ଏବଂ ସମାନ ପରିମାଣର GAPDH cDNA କୁ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା। 40 ଚକ୍ର ପାଇଁ PCR ଅବସ୍ଥା 50°C ରେ 2 ମିନିଟ୍, 94°C ରେ 10 ମିନିଟ୍, 95°C ରେ 15 ସେକେଣ୍ଡ ଏବଂ 60°C ରେ 1 ମିନିଟ୍ ଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁସାରେ ତୁଳନାତ୍ମକ Ct (ଆମ୍ପ୍ଲିଫିକେସନ୍ ପ୍ଲଟ୍ ଏବଂ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍-ପଏଣ୍ଟରେ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା) ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଟାର୍ଗେଟ ଜିନର ସାନ୍ଦ୍ରତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।

ଏଫଓବି ମୂଲ୍ୟ:US $0.5 - 9,999 / ଖଣ୍ଡ

ସର୍ବନିମ୍ନ ଅର୍ଡର ପରିମାଣ:100 ଖଣ୍ଡ/ଖଣ୍ଡ

ଯୋଗାଣ କ୍ଷମତା:ପ୍ରତି ମାସରେ 10000 ଖଣ୍ଡ/ଖଣ୍ଡ